ทำความเข้าใจการทดสอบความบริสุทธิ์ HPLC: วิธีอ่านใบรับรองการวิเคราะห์

High-Performance Liquid Chromatography (HPLC) เป็นวิธีวิเคราะห์มาตรฐานทองสำหรับการกำหนดความบริสุทธิ์ของเปปไทด์ ซัพพลายเออร์เปปไทด์ที่มีชื่อเสียงทุกรายจัดให้มีใบรับรองการวิเคราะห์ (COA) พร้อมข้อมูล HPLC สำหรับแต่ละล็อต

บทความนี้อธิบายวิธีการทดสอบ HPLC วิธีตีความ chromatogram และเอกสาร COA และระดับความบริสุทธิ์หมายความว่าอย่างไรสำหรับงานวิจัยประเภทต่างๆ

HPLC คืออะไร?

HPLC แยกส่วนประกอบของส่วนผสมตามคุณสมบัติทางเคมีขณะที่ผ่านคอลัมน์ที่บรรจุวัสดุ stationary phase ในการวิเคราะห์เปปไทด์ reverse-phase HPLC (RP-HPLC) เป็นวิธีมาตรฐาน

กระบวนการทำงานดังนี้:

1. 1ตัวอย่างเปปไทด์ที่ละลายเล็กน้อยถูกฉีดเข้าสู่ระบบ HPLC
2. 2Mobile phase พาตัวอย่างผ่านคอลัมน์
3. 3โมเลกุลต่างๆ ทำปฏิกิริยากับ column packing ในอัตราที่ต่างกัน ทำให้ elute ในเวลาที่ต่างกัน
4. 4UV detector วัด absorbance ของแต่ละส่วนประกอบ
5. 5ข้อมูลจะถูก plot เป็น chromatogram — กราฟของ absorbance เทียบกับเวลา

การอ่าน Chromatogram

Chromatogram แสดง peaks ที่เวลาการกักเก็บต่างกัน แต่ละ peak แสดงสปีชีส์โมเลกุลที่แตกต่างกันในตัวอย่าง

Peak หลัก

Peak ที่สูงที่สุดแสดงเปปไทด์เป้าหมาย พื้นที่ใต้ peak นี้ เทียบกับพื้นที่รวมของ peaks ทั้งหมดให้ เปอร์เซ็นต์ความบริสุทธิ์

Peaks รอง

Peaks ที่เล็กกว่าแสดงสิ่งเจือปน ซึ่งอาจรวมถึง:

• Deletion sequences — เปปไทด์ที่ขาดกรดอะมิโนหนึ่งตัวหรือมากกว่า
• Truncated sequences — ผลิตภัณฑ์สังเคราะห์ที่ไม่สมบูรณ์
• Oxidized species — methionine หรือ tryptophan residues ที่ถูกออกซิไดซ์
• Deamidation products — asparagine หรือ glutamine residues ที่สูญเสีย amide group

ทำความเข้าใจระดับความบริสุทธิ์

≥95% ความบริสุทธิ์

เหมาะสำหรับ cell-based assays ส่วนใหญ่ การศึกษาการจับ และการทดลองคัดกรองเบื้องต้น

≥98% ความบริสุทธิ์

แนะนำสำหรับการศึกษาเชิงปริมาณและการทดลอง dose-response

≥99% ความบริสุทธิ์

จำเป็นสำหรับวิธีวิเคราะห์ที่ไว และการวิจัยที่จะตีพิมพ์ นี่คือเกรดที่ LifeSpanSupply จัดหาสำหรับสารทุกตัว

COA ที่ครอบคลุมควรรวมอะไรบ้าง?

• เปอร์เซ็นต์ความบริสุทธิ์ HPLC พร้อมรายละเอียดวิธี
• ข้อมูล Mass spectrometry (MS) ยืนยันน้ำหนักโมเลกุล
• คำอธิบายลักษณะ — ควรตรงกับรูปแบบที่คาดหวัง
• หมายเลขล็อต/ชุด — สำหรับการตรวจสอบย้อนกลับ
• วันที่ผลิตและวันหมดอายุ
• เงื่อนไขการจัดเก็บ
• Net peptide content — ปริมาณเปปไทด์ที่ใช้งานได้จริง

ผลิตภัณฑ์ทั้งหมดเป็นสารเคมีสำหรับการวิจัยในห้องปฏิบัติการเท่านั้น ไม่ใช่สำหรับการบริโภค